yao物对细胞的IC50检测
IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。软gu细胞培养(1)豚鼠脱颈处死，备皮，用75%酒精消毒背部及四肢皮肤。它能指示某一yao物或者物质(yi制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质，比如酶，细胞受体或是微生物)的半量。在凋亡方面，可以理解为一定浓度的某种药wu诱导肿liu细胞凋亡50%，该浓度称为50%抑制浓度，即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度，IC50值可以用来衡量yao物诱导凋亡的能力，即诱导能力越强，该数值越低，当然也可以反向说明某种细胞对yao物的耐受程度。
大鼠主动脉内皮细胞的分离培养
方法：分离大鼠主动脉,直接贴壁于培养皿中,荧光倒置显微镜观察细胞形态,免yi组化Ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时组织块边缘有游离的 新生细胞长出,7天即融合成片.消化传代后细胞呈短梭形或三角形,单层生长,铺路石状,Ⅷ因子表达阳性,呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法,冻存细胞存活率高,为体外研究提供了稳定的模型.
大鼠脂肪的分离
将手术切取的大鼠脂肪组织尽量剪碎后移至离心管，其余步骤与人脂肪的分离一致。
经手术切除获得的大鼠皮下脂肪组织消化后原代培养24 h，且肉眼观察会发现培养瓶底部贴附着一层网状薄膜，轻轻摇晃培养瓶可使这层网状薄膜从瓶壁上脱落，镜下观 察发现大部分细胞都附着于这层膜上，通过术获取的人脂肪组织消化后则无此现象。增加胶原酶的量和消化时间也无法避免，取材时的或脂肪间结缔组织未被完全消化，穿过细胞筛进入了培养瓶并沉淀于瓶底部形成的。这种掺入可以稳定存在，随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。胶原蛋白酶虽然可以特异性水解胶原蛋白的三维螺旋结构，但不会损伤其他蛋白质。处理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 消化5 min。然后利用40 μm的细胞筛过滤后传代。 根据作者的经验，每毫升手术切除的大鼠脂肪可分离基质血管成分细胞约1.81×106个。原代培养2.24×10^7个大鼠基质血管成分细胞，40 h后传代时约剩余 6.2×10^6个细胞，细胞剩余率27%。
